支原體是什么？如何判斷細胞是否被支原體感染？如果感染了，細胞應該如何處理？

以上三個問題，大多數(shù)養(yǎng)細胞的同學都會遇到，我們今天就講一下支原體污染的問題。

支原體，是一種沒有細胞壁結構，在獨立生活和細胞內(nèi)寄生之間存活的原核生物，其結構和典型的細菌相近。

部分支原體可以致病，例如肺部支原體。由于支原體沒有細胞壁，許多常見的抗生素，如青霉素對其沒有殺傷力。

和常見的細菌污染不同，細胞被支原體污染后，采用常規(guī)顯微鏡無法直接在明場視野下看到支原體，后者也并不會直接破壞宿主細胞結構，而是改變細胞的代謝。

所以，細胞往往表現(xiàn)出生長狀態(tài)變差，例如生長緩慢，不像細菌污染那樣大量死亡。因此，被支原體污染的細胞是很難察覺出異樣的。

那么，如何判斷細胞是否被支原體污染呢？

常用的方法有熒光染色、PCR、ELISA、免疫染色、放射自顯影以及微生物學分析。

對于大多數(shù)同學而言，最簡的辦法，應該是采用熒光染色。具體來說，就是使用Hoechst 33258對細胞進行染色。

其原理是被染色后的細胞，在50X或100X目鏡下觀察，可以看到細胞核呈藍色熒光，細胞內(nèi)染色質(zhì)上有明確的藍色熒光微粒或絲狀物，后者就是支原體的標志特征。

動物細胞培養(yǎng) 第7版 配圖

使用Hoechst 33258進行染色的實驗方法見下圖（參考資料：動物細胞培養(yǎng) 第7版）。

如果實驗室有條件的同學，也可以直接購買商業(yè)化的檢測試劑盒，這樣會更加方便和高效。

我們之前講過，如果細胞被微生物污染，例如細菌，那么應該直接把被污染的細胞清理掉，而不是嘗試挽救。

同理，當細胞被確認感染了支原體后，第一選擇的處理措施依然也是清理掉污染的細胞。

除非該細胞非常重要，或無法替代，此時我們可以嘗試去除支原體污染。以下，我們也為大家分享支原體清除的實驗操作建議。（參考資料：動物細胞培養(yǎng) 第7版）

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